aa-def rats revealed
shortened, irregularly distributed trabeculae beneath
the growth plate cartilage of tibiae (Fig. 1B), compared
with those of aa+ rats (Fig. 1A). These trabeculae
were fragmented and surrounded by thick
fibrous tissue. This fibrous tissue stained intensely
for ALPase, a hallmark of osteoblastic cells, and contained
many TRAPase-positive osteoclasts (Fig. 1E).
In contrast, the ascorbic acid-sufficient (aa+) bones
revealed ALPase-positive osteoblasts and TRAPasereactive
osteoclasts on the surfaces of metaphyseal
trabeculae (Fig. 1C).
Higher numbers of cells immunopositive
for PCNA were seen in the fibrous tissue
layer in aa-def bones when compared to similar areas
in aa+ metaphyses (Compare Figs. 1D and F).
対照的に、アスコルビン酸の足りている（aa+の）骨は、骨幹端小柱帯の表面に、アルカリ性リン酸分解酵素陽性の骨芽細胞とTRAPase反応性破骨細胞を示しました（図1C）。
aa+骨幹端の類似のエリアと比較すると、より高い数の、PCNAに対する免疫陽性細胞が、aa-def骨で繊維様組織層に見られました（図1DとFを比較してください）。
これとは対照的に、アスコルビン酸の十分な（aa+）の骨がALPase陰性骨芽細胞と骨幹端の骨梁の表面にTRAPaseの反応破骨細胞（図１C）を明らかに示しました。
PCNAの免疫細胞のより高い数字が、aa+骨幹端の置ける同様の領域（図１D及びFを比較）と比較した場合、aa-def 骨の繊維組織層に見られた。
Highly magnified microscopy showed that osteoblasts
in aa-def bones were not attached to the bone
surfaces (Figs. 2A, B). Only few osteoblasts were
lying on the surfaces of the metaphyseal trabeculae
at the chondro-osseous junction; instead, fibroblastlike
cells surrounded the fragmented trabeculae in
this area (Fig. 2A). Trabecular surfaces stained intensely
for toluidine-blue (Fig. 2A), osteopontin, and
osteocalcin (Figs. 2C, D). Under TEM, an electrondense
linear structure could be found in a similar
location (Fig. 2B). The fibroblast-like cells included
round and enlarged rER which contained evenly
electron-dense material (Fig. 2E).
Amorphous organic
material including fine fibrillar structures were
associated with A.
ほんのわずかの骨芽細胞しか、軟骨骨接合の骨幹端小柱帯の表面にはありませんでした。その代わりに、線維芽細胞のような細胞が、このエリアで、断片化した小柱帯を囲んでいました（図2A）。小柱帯表面は、トルイジン青（図2A）、オステオポンチン、およびオステオカルシンのために強く染まっていました（図2C、D）。
透過型電子顕微鏡では、類似の場所で、高電子密度の線形構造が見つかることがあります（図2B）。線維芽細胞様の細胞は、均一に高電子密度の物質を持つ、丸い拡大したrERを含んでいました（図2E）。
細かな原繊維構造を含むアモルファス有機物質は、Aと関連づけられていました。
Thus, in the metaphysis of aa-def tibia, osteoblasts
tended to detach from the bone matrix, and many
osteoblasts and fibroblast-like cells in the fibrous tissue
layer showed enlarged rER, indicating the accumulation
of organic materials inside the rER.
[Matrix mineralization in the ascorbic acid-deficient bone]
Bone mineralization in the primary trabeculae close
to the chondro-osseous junction was examined by
calcein labeling, and aa-def bones showed a small
amount of bone deposition onto mineralized cartilage
(Compare insets of Figs. 3A, B).
Bone matrix
could be seen surrounding the cartilage cores of primary
trabeculae in aa+ rats (Fig. 3A),whereas aadef
cartilage was often seen without a surrounding
bone matrix (Fig. 3B).
［アスコルビン酸が不足している骨のマトリックス鉱化作用］
軟骨骨接合の近くの始原小柱帯の骨鉱化作用はカルセイン標識化により調べられ、aa-def骨が、鉱化した軟骨上に、少量の骨堆積を示しました（図3A、Bの折り込みを比較してください）。
骨基質は、aa+ネズミ（図3A）の始原小柱帯の軟骨コアを囲んでいるのが見られることがありますが、aadef軟骨は周囲に骨基質（図3B）を持たないのが多くが見られています。
「aa-def骨が、鉱化した軟骨上に、少量の骨堆積」は、「aa-def骨の、鉱化した軟骨上の少量の骨堆積」と訂正いたします。
「aadef軟骨は周囲に骨基質（図3B）を持たないのが多くが見られています」は、「aadef軟骨は、周囲に骨基質を持たない例が多いようです（図3B）」と訂正いたします。
[アスコルビン酸欠乏骨中のマトリックスの石灰化]
軟骨ー骨接合部に近い第一の骨梁に置ける骨の石灰化は、カルセイン表示で調べると、aa-def骨が石灰化した軟骨（図の挿入図３A、Bと比較)の上に少量の骨沈着を示しました。
Aa-def軟骨がしばしば周囲の骨基質（図３B）なしで見られたのに対し、骨基質が、aa+（図３A）のラットに置ける主要小柱の軟骨のコアを囲むのを見ることが出来ました。
（アスコルビル酸欠乏骨の基質ミネラル化）
軟骨結合部に近い主要小柱の骨ミネラル化はカルセイン ラベルによって調査され,aa-def骨はミネラル化した軟骨上に少量の骨沈殿を示した。（図3A,Bの挿入図を比較してください）
骨基質はaa+ネズミ（図3A)の主要小柱の軟骨髄を覆っている一方、aa-def軟骨はしばしば骨基質（図3B)を覆っていないことが確認できた。
Under TEM, in contrast
with normal striated collagen fibrils of aa+ animals
(Fig. 3C), amorphous, feather-like, or fibrillar structures
were seen associated with osteoblasts with
round-shaped rER in aa-def specimens (Fig. 3D).
Thus, the ultrastructure of collagen fibrils was
shown to be different between aa-def and aa+
groups.
Next, mineralization in the metaphyseal trabeculae
was assessed. In a state of ascorbic acid sufficiency,
von Kossa staining revealed numerous granular
structures adjacent to mature osteoblasts in the primary
trabeculae (Figs. 4A, B). Accordingly, TEM
observations portrayed numerous matrix vesicles
and mineralized nodules, some of which were associated
with collagen fibrils (Fig. 4C).
このように、コラーゲン・フィブリルの超微細構造は、aa-defとaa+グループの間では異なることがわかりました。
次に、骨幹端小柱帯の鉱化作用の評価をしました。アスコルビン酸が足りている状態では、フォンコッサ染色で、始原小柱帯の成熟した骨芽細胞に隣接する、多数の粒状組織を示しました（図4A、B）。したがって、透過型電子顕微鏡観察で、多数のマトリックス小嚢と鉱化小結節が描写され、その幾つかはコラーゲン・フィブリルと関連していたのです（図4C）。
次に骨幹端の小梁石灰化の評価を行った。アスコルビン酸が充分にある状態でのフォン・コッサvon Kossa染色により、主骨梁の成熟した骨芽細胞と接触している数多くの粒状構造が明らかになった (4A, B図)。これに伴って、透過型電子顕微鏡により、数多くの基質小胞及び石灰化結節が、一部はコラーゲン線維と結合して観測された (4C図)。
At a higher
magnification, mineral crystals could be seen growing towards the collagen fibrils from the mineralized
nodules (Fig. 4D).
Crystal deposition unrelated to
mineralized nodules was not seen in normal collagen
fibrils. In aa-def metaphyses, von Kossa staining
verified poor mineralization and a markedly
reduced trabecular number (Figs. 5A, B). Fragmented
trabeculae neighboring the growth plate cartilage
showed granular structures stained with von Kossa’s
solution.
TEM imaging from corresponding areas
demonstrated numerous matrix vesicles and mineralized
nodules (Figs. 5C, D).
Therefore, bone mineralization
still seemed to take place even in the
circumstance of ascorbic acid deficiency. At higher
magnification,
鉱化された小結節と関係しない結晶析出は、通常のコラーゲン・フィブリルで見られませんでした。aa-def骨幹端においては、フォンコッサ染色が、鉱化作用が不十分で小柱帯数が著しく減少することをを確認しました（図5A、B）。成長板軟骨に隣接している断片化した小柱帯は、フォンコッサの溶液で染まった粒状組織を表わしました。
対応するエリアからの透過型電子顕微鏡撮像は、多数のマトリックス小嚢や鉱化小結節を説明しました（図5C、D）。
したがって、骨鉱化作用は、アスコルビン酸欠乏の状況でも依然として起こっているようでした。より高倍率であれば、
透過型電子顕微鏡（TEM）による該当領域画像には数多くの基質小胞と石灰化結節が観察された (5C, D図参照)。
このように、骨石灰化はアスコルビン酸欠乏の場合においてさえ生じるようである。
より高い倍率で、…
「高倍率顕微鏡検査で」は、「高倍率顕微鏡検査では」と訂正いたします。
「透過型電子顕微鏡では」は、「透過型電子顕微鏡で」と訂正いたします。
了解しました。ご連絡ありがとうございました。